细胞免疫荧光检测（IF)操作步骤

    免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下即可观察到荧光。实验步骤如下：

1. 接种细胞:将处于对数生长期的细胞接种于共聚焦专用培养皿里，培养24小时。

2. 固定：待细胞融合度达到50-70%时，弃去培养基，用冰冷PBS洗3遍，然后加入4%冷的多聚甲醛固定20分钟。

3. 清洗：弃去多聚甲醛后，用冰冷PBS洗三遍，每次5分钟。

4. 破膜：加入0.25%Triton X-100（PBS配制）破膜20分钟。

5. 清洗：冰冷PBS洗三遍，每次5分钟。

6. 封闭：加入含5%BSA的PBS室温封闭1小时。

7. 一抗孵育：加入含5%BSA的PBS配制的一抗溶液室温孵育2小时或4℃过夜。

8. 清洗：加入PBST（含0.1%吐温20）洗三遍，每次5分钟。

9. 二抗孵育：加入含5%BSA的PBS配制的二抗溶液室温孵育1小时（避光）。

10.清洗：加入PBST洗三遍，每次5分钟。

11.DAPI染核：加入DAPI染色液，室温染色10分钟。

12.加入PBST洗三遍，每次5分钟。

13.上机检测。