酶联免疫吸附检测（ELISA）操作步骤

    酶联免疫吸附检测一般采用双抗夹心法，主要原理是将一种针对待测抗原的抗体（捕获抗体）包被到聚丙烯96孔板中，然后利用抗原抗体之间的特异性结合来吸附待测抗原，再利用标记生物素或酶的针对待测抗原其它表位的检测抗体定量检测吸附到96孔板中的待测抗原。实验步骤如下：

1. 样品孵育:取出包被了捕获抗体的96孔酶标板，加入系列稀释度的标准品和待测样品，室温或37℃孵育1小时。

2. 清洗：样品孵育结束后，倒去样品，利用洗涤液（含0.2%吐温-20的PBS）清洗酶标板3次，300μl/孔，每次1分钟。

3. 检测抗体孵育：酶标板各孔加入100μl检测抗体，室温或37℃孵育1小时。

4. 清洗：倒去检测抗体，利用洗涤液清洗酶标板3次，300μl/孔，每次1分钟。

5. 酶标亲和素孵育：各孔加入100μl酶标亲和素，室温或37℃孵育0.5小时。

6. 清洗：倒去酶标亲和素溶液，利用洗涤液清洗酶标板4次，300μl/孔，每次1分钟。

7. 底物反应：各孔加入100μl酶反应底物，室温或37℃孵育5-10分钟。然后加入100μl终止液终止反应。

    8. 上机检测。